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ELISA试剂盒途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性
发布时间:2019-02-15   点击次数:227次

    途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物学活性抗原,通常不宜选用静脉打针。
不一样个别对共同抗原的反应性不一样,而且不一样抗原发作免疫反应的能力也有强有弱,因此常常在打针抗原的一起,参与能增强抗原的抗原性物质,以影响机体发作较强的免疫反应,这种物质称为免疫佐剂。
   免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合,用振荡器混匀成乳状,也可以在免疫前取需求量佐剂置乳钵中研磨,均匀后再边磨边滴参与等容积抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再继承研磨成乳剂,滴于冰水上5~10min内完全不分散停止。
交叉反应率低,标明抗血清的特异性好,反之则特异性差。
收集的血液置于室温下1h支配,凝聚后,置4℃下,过夜(切勿冰冻)分出血清,离心,4000rpm,10min。
     取兔血有两种方法,一是耳缘静脉或耳动脉放血,二是颈动脉入血,也可心脏采血。加强免疫时用不完全佐剂,初度免疫时皮下打针百日咳疫苗0.5ml,加强免疫时不必打针百日咳疫苗。
在无菌条件,吸出血清,分装(0.05~0.2ml),贮于-40℃以下冰箱,或冻干后储存。
取动脉或静脉放血时,将兔放入一个特造的木匣或笼内,耳露于箱(笼)外,也可由另一人捉住兔身。
    避免丢掉抗原,亦可用一打针器装抗原液,另一打针器装佐剂,二者以聚乙烯塑料管联接,然后二者往复重复抽吸,约数十分钟后即能完全乳化。
每2~3周加强免疫一次。
制作方法:按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内,用超声波使之混匀,高压灭菌,置4℃下保留备用。
ELISA试剂盒特异性是以交叉反应率来标明的。
交叉反应率通常是用比赛抑制曲线来判定的。
若用兔,用纯种新西兰兔,一组三只,兔的体重以2~3kg为宜。
家兔是zui常用以发作抗体的动物,因此这儿首要谈论兔血的收集。
颈动脉放血时,将兔仰卧,固定于兔台,剪去颈部的毛,切开皮肤,显露颈动脉,插管,放血。
不一样浓度的抗原和近似抗原物质分别做比赛抑制曲线,计算各自的联络率(B/T或B/B0),求出各清闲IC50时的浓度,按下列公式计算交叉反应率。二礼拜后,可在另一耳放血。
此法可重复屡次放血。
作免疫用的动物有哺乳类和禽类,首要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等,实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。
在第2次加强免疫后2周,从耳缘静脉取2~3ml血,制备血清,检查抗体效价。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血,鼠等小动物取血可参看有关材料。
剪去耳缘的毛,用少数二甲苯涂改耳廓,30s后,耳血管扩大、充血。用手轻拉耳尖,以单面剃须刀或尖的手术刀片,敏捷切开动脉或静脉,血液即流出,每次可收集30~40ml。
抗原剂量,初度剂量为300~500μg,加强免疫的剂量约为初度剂量为1/4支配。
C冰箱保留。检查合格后即以其中一打针器作打针用。
佐剂除了延伸抗原在体内的存留时间,添加抗原影响效果外,更首要的是,它能影响网状内皮系统,使介入免疫反应的免疫活性细胞增多,推进T细胞与B细胞的相互效果,然后增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的发作。
ELISA试剂盒未抵达预期效价,需再进行加强免疫,直到满足时停止。

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