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人热休克蛋白90Elisa试剂盒实验步骤
发布时间:2019-12-25   点击次数:118次

实验步骤:
1. 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。人热休克蛋白90(HSP-90)每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。
2. 弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
3.人热休克蛋白90(HSP-90)每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
4.取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
5.人热休克蛋白90(HSP-90)测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,人热休克蛋白90(HSP-90)再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

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