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pHyVec4

简要描述:

上海研生实业有限公司pHyVec4质粒是使用广泛的基因操作工具,可以进行编码基因、microRNA、lncRNA的功能研究、启动子活性、转录因子及3’UTR调控研究等。

质粒名称:pHyVec4

质粒规格:2ug

 

实验步骤:

1)质粒提取

1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中

2.加入100溶液1,振荡至彻底悬浮

3。加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置

3分钟

4。加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins

5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混

合均匀10,000离心5min

将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉

降DNA

7。10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离

心5分钟

8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇

9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA

2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳

灌胶:胶中加入芡光染料< SYBR Green)

加样:质粒+上样緩冲液→混匀

电泳

结果观察:UV灯下

 

pHyVec4实验分析:

裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因

用碱裂解法除去杂质

1、防止DNA裂解: Solution1

1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解

2)、所含EDTA抑制酶活性

2、溶解与变性: Solution2

1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性

 

100370-200301 泛酸钙 HPLC法含量测定 50mg

100371-200802 乌苯美司 含量测定 100mg

100373-200502 阿苯达唑 含量测定 100mg

100374-200903 苯磺酸氨氯地平 含量测定 100mg

100375-200502 盐酸特拉唑嗪 含量测定 100mg

100376-201001 氯化钠 含量测定 100mg

100379-200501 氨力农 UV法含量测定 100mg

100380-200301 更昔洛韦 含量测定 50mg

100381-200301 肾上腺色腙 检查用 50mg

100382-200301 紫杉醇 含量测定 30mg

100384-200501 大蒜素 含量测定 0.5ml

100385-200401 豆腐果苷 HPLC法含量测定 100mg

100386-200702 吡拉西坦 含量测定 100mg

100387-200401 呋咱甲氢龙(夫拉扎勃) 含量测定 50mg

100388-200401 依托泊苷 含量测定 100mg

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